Жива ваксина срещу колибацилоза телета

C12N1 - микроорганизми, например протозои; техните състав (лекарствени препарати, съдържащи материал от микроорганизми А61К 35/66; изготвяне на фармацевтични състави, съдържащи бактериални антигени или антитела, например бактериални ваксини А61К 39/00); методи на отглеждане, поддържане или запазване на микроорганизми или техни състави; методи за получаване или изолиране на състави, съдържащи микроорганизми; хранителни среди

A61P31 / 04 - антибактериални

A61K39 / 108 - Escherichia; Klebsiella

Собствениците на патента RU 2288006:

Саратов държавна научна институция научноизследователски ветеринарномедицински гара на Българската академия на селскостопанските науки (RU)

Изобретението се отнася до ветеринарната микробиология и биотехнология и могат да бъдат използвани за получаване на живи ваксини срещу бацилоза селскостопански животни, особено телета.

Kolibakterioz (ehsherihiozom) - инфекциозно заболяване, причинено от ентеропатогенните Escherichia, е широко разпространена в много страни по света и причинява значителни икономически загуби за животновъдството, поради високата смъртност на телета и прасета.

Известен ваксина срещу бацилоза селскостопански животни (вж. Патент на България №2053792 т. 61 K 39/108, Publ. 10.02.96 г), съдържащ формалин инактивиран антигени адхезивни K99, K88av, K88as, K88ad, F41, Att25, 987R конюгат топлина лабилен и топлоустойчив ентеротоксин на Escherichia и адювант във формата на алуминиев хидроксид.

Въпреки това, инактивирани ваксини, заедно с положително действие, в някои случаи, могат да предизвикат алергични реакции поради добавянето на добавки към него, както и разрушават естествените процеси на разграждане чрез промяна на качествения и количествен състав на микрофлора. Освен това, производството на инактивирани ваксини изискват значителни усилия.

Въпреки това, ваксината е предназначена за подкожно приложение. В допълнение, той отнема много труд за производство и употреба, тъй като тя дава възможност за две E.coli щамове и двойно приложение към животни. Механизмът на действие е насочено към подобряване на хуморален имунен отговор, което показва развитието на инфекция при ваксинираните животни, а не да ги предпази от заболяване.

Въпреки това, този инструмент е предназначен за перорално приложение. Освен това, въвеждането на средства за получаване на коластра може да повлияе неблагоприятно на естествената чревна биоценоза, причинявайки дисбактериоза.

Изобретението се отнася до проблема за създаване на жива авирулентна ваксина срещу бацилоза телета за интрамускулно инжектиране, лесни за производство и използване.

Това позволява да се заключи, че присъствието на изобретателска стъпка в настоящото изобретение.

Щам, предназначено за производство на ваксина, депозиран в Vsebolgarskom държавен институт за научни изследвания за контрол на стандартизацията и сертификацията на ветеринарни препарати и фуражи (VGNKI) (Сертификат за депозит са включени). Щам характеризира със следните свойства.

Културни и морфологични характеристики.

Култивирането се извършва първо на месо-пептон бульон (ВСН), след това на месо-пептон агар (МРА) при 37 # x000B0 С в продължение на 18 до 48 часа при аеробни условия. Така на колонии ВСН растат дифузно, образувайки интензивно мътност и лесно се разграждат утайка първоначално формира на МФК гладки, изпъкнали, блестящи колонии с гладки ръбове S-образна форма. По-нататък, формирането на преход от S- да R форма колонии и сухо назъбени R форма колонии (50%). Ендо агар образува тъмночервени колонии с метален блясък.

Микроорганизмът е експонати мобилност каталаза активност, дава положителна реакция с метилово червено, произвежда индол, фермент глюкоза с метеоризъм и лактоза, арабиноза, манитол, малтоза, ксилоза, сорбитол, дулцитол.

Условия и състава на медиите за да произвеждат токсини: Hottinger бульон.

Продуктът се синтезира от щам на Ешерихия коли Б-5 - термолабилни екзотоксин не се влияе от неутрализиращи анти-токсичен поливалентен серуми срещу бацилоза (ehsherihioza), селскостопански животни

Молекулно генетична особеност щам - щам в релсите S- и R-форми имат размер репликон от около 0.3 квадратни метра, в този репликон е ген, кодиращ В субединицата на топлина лабилен токсин (LT), която произвежда имуногенна активност на щам. LT структурен ген допълнително се интегрира в хромозомата на бактериалната клетка. Клетките на щама е репликон, носещи регулаторни свойства на генетична информация, необходими за синтезата на RT-продукти. Щамове на разположение имуногенни епитопи, но няма репликация, отговорен за реактогенността на Escherichia.

Чувствителност към антибиотици (инхибиране зона растеж в mm): полимиксин - 11, стрептомицин - 25, хлорамфеникол - 25 Рифампицин - 9, карбеницилин - 15; Това не е чувствителен към оксацилин, доксициклин, линкомицин, тетрациклин, олеандомицин, ампицилин, пеницилин.

Интраперитонеално прилагане щам култура при концентрация от 5 # x000B7 МК 10 август / cm 3 и обем от 0.5 мл бяла смърт мишки води. LD50 - 1,2 # x000B7; 10 Октомври MK / см 3. бял мишки Смъртта настъпва в рамките на дни.

Определяне ВИДА щам свойства.

За определяне на щам на токсин култивиране се провежда в състава на хранителните вещества Mundeli продължение на 20 часа. Получената култура бульон се отделя в toksinosoderzhaschy материал и bakmassu от стерилизиране филтруване. течност култура, лишена от бактериален компонент служи материал, съдържащ екзотоксин Е.коли.

Стабилността се определя чрез нагряване до температура toksinosoderzhaschego материал по време на 10 минути кипене при 100 # x000B0 С и последващо въвеждане в бели мишки.

Определяне TL-токсин се провежда при използване на загрята toksinosoderzhaschego материал не се нагрява и хранителна среда Mundeli - като отрицателна контрола.

Култивиране на щама може да се проведе, например, разработена и патентована Saratov Nieves (патент №2142505) на хранителна среда със следния състав (% тегл.): 5-20 aminokrovin; пептон, 0,6-1,5; амониев хлорид 0,08-0,18; натриев хлорид 0.09-0.11; казеин хидролизат, 9-20; размножаване "игла" 52-61; дестилирана вода - останалото. На тази хранителна среда се провежда в продължение на 7 дни при температура 37 # x000B0 С, след това суспензията се центрофугира при 6000 об / мин в продължение на 30 минути. Супернатантата беше ентеротоксигенни снимки.

Метод за производство на жива ваксина срещу колибацилоза телета е както следва.

Извършва култивирането на щам. За тази цел щам Е.коли "Б-5" първоначално посяват в епруветки за месо-пептон бульон (ВСН), след това на месо-пептон агар (МРА) при 37 # x000B0 С в продължение на 18 часа при аеробни условия.

Суспензията е предназначен само за приложение при телета.

За да се оцени интензивността на имунитет се използват две групи бели мишки. Първата група от мишки (10 животни) бяха подложени на единична имунизация култура на E.coli щам B-5, втората група от мишки (10 животни), лекувани с физиологичен разтвор в същите дози е контрола. След 14 дни, двете групи животни се заразяват интраперитонеално с вирулентен култура на Е.коли при концентрация 5 # x000D7; 10 август микробни клетки за 1 cm 3 от физиологичен разтвор при доза от 0.5 мл. Резултатите са обобщени в таблица 1, от което следва, че безопасността на имунизираните животни е 100% в контролната група, всички животни са умъртвени.

Пример 3. За да докаже своята авирулентен ваксина се прилага на мишки, при концентрация от 5 # x000D7; 10 август микробни органи. мишки смърт не дойде.

5 телета в контролната група, която се прилага в същата доза физиологичен разтвор, двадесет дни намаля до 2 телета.

Резултатите са обобщени в Таблица 2.

Брой животни в група

До 10 дни от възрастта

Той падна на 20-дневна възраст

Провежда изследвания върху използването на kolibakteriozno ваксина при здрави и болни телета. Ваксината се прилага интрамускулно веднъж доза от 2,5 мл на главата. В контролната група от здрави животни получи физиологичен разтвор, и болни телета са били лекувани с помощта на антибиотици.

Изследванията потвърждават високата ефективност на предложеното kolibakteriozno ваксината.

Резултатите са обобщени в Таблици 3 и 4.

Таблица 3.
В резултат на прилагането на kolibakteriozno ваксина при здрави телета

Име на групи животни

Броят на телета в групата

До 10 дни от възрастта

Той падна на 20-дневна възраст

Таблица 4.
Резултатът от прилагането на ваксината при пациенти kolibakteriozno телета

Име на групи животни

Броят на телета в групата

До 20 дни от датата на

Производствени тестове на ваксината са били проведени върху 203 клинично здрави и болни телета във фермите на шестте области на региона Саратов.

Ваксината се прилага при телета на възраст от 2-9 дена интрамускулно веднъж в доза от 2,5 # x000D7 10 октомври -3,0 # x000D7 10 октомври MK на главата му. В контролната група животни (в количество от 156 глави), използвани в конвенционални методи за превенция на колибацилоза ферми. В резултат на проучвания до ден 20 от експерименталната група падна 6 (3%) и на контролните групи - 33 (21.2%) животни. Използването на ваксина, която намалява смъртността на телета в 7 пъти.

По този начин, изобретението ваксина авирулентен не реактогенен, не е алергенен, не предизвика възпалителни реакции на мястото на инжектиране и да се осигури имунна защита на телетата от бацилоза.

Изобретението се отнася до биотехнологията.

Изобретението се отнася до областта на биохимията и генното инженерство и могат да бъдат използвани в рибовъдството.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално производството на ваксини.

Изобретението се отнася до областта на генното инженерство и биотехнологиите и може да се използва в медицината.

Изобретението се отнася до микробиология и бактериални генетика, по-специално, до методи за трансдукция антракс бацили и внимателно.

Изобретението се отнася до биотехнологията и е бактерия E.coli, който е с дефицит в хромозомни DegP гени и КНР, кодиращ протеаза DegP и КНР, съответно, и мутантен ген SPR, който включва подтискане последователност КНР E.coli, с точкова мутация в позиция 148 което води до замяна на триптофан с аргинин при позиция 148.

Изобретението се отнася до производството на мляко, по-специално за производство на ферментационни млечни продукти.

Изобретението се отнася до биотехнологията, специфично към културалната среда производство и може да се използва в производството на бактериални препарати.

Изобретението се отнася до ветеринарната медицина.